【产品名称】

通用名称：乙型肝炎病毒核心抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

【包装规格】

48人份/盒、96人份/盒、576人份/盒

【预期用途】

本产品用于体外定性检测人血清或血浆中乙型肝炎病毒核心抗体。

可作为乙型肝炎病毒（HBV）感染的临床诊断指标之一。

【检验原理】

乙型肝炎病毒核心抗体检测试剂盒采用竞争抑制法检测乙肝核心抗体（抗-HBc），用基因工程重组乙肝核心抗原（HBcAg）包被板条，用HRP标记的抗-HBc为酶标记物，以四甲基联苯氨（TMB）和过氧化物为底物。加入待测标本，同时加入抗-HBc-HRP，与抗原形成竞争结合，当标本中抗-HBc含量高时，则抗-HBc-HRP与乙肝核心抗原（HBcAg）结合少，加入TMB底物时显色淡，反之则显色深。在实验结束时，无颜色或颜色变化微弱的，提示有乙肝核心抗体（抗-HBc）存在，显色深的，则提示无乙肝核心抗体（抗-HBc）存在。

【主要组成成分】

注意：不同批号试剂盒中试剂盒组成1、2 不可混用。

各组份组成：

酶结合物：Na₂HPO₄·12H₂O 6.7g/L；NaH₂PO₄·2H₂O 0.16g/L；KCl 0.2g/L；NaCl 8g/L；固体A（酶保护剂）0.6g/L；小牛血清 50mL/L；液体A（液体防腐剂）7mL/L；指示剂1  1.25mL/L；HBcAb-HRP适量。

阳性对照：Na₂HPO₄·12H₂O  2.9g/L；NaCl  8g/L；KCl  0.2g/L；KH₂PO₄  0.2g/L；NaN₃  60g/L；乙二醇 200mL/L；小牛血清 200mL/L；指示剂1  1.25mL/L；阳性血清适量。

阴性对照：Na₂HPO₄·12H₂O 6.7g/L；NaH₂PO₄·2H₂O  0.16g/L； KCl  0.2g/L ；NaCl  8g/L；液体A（液体防腐剂） 5mL/L；指示剂2  0.55mL/L；阴性血清 200mL/L。

浓缩洗涤液：Na₂HPO₄·12H₂O  58g/L； NaCl  160g/L；KCl  4g/L；KH₂PO₄  4g/L；Tween-20  10 mL/L 。

显色剂A：柠檬酸 8g/L；试剂A 0.004g/L；试剂B 2.4mL/L；过氧化尿素 0.7g/L。

显色剂B：柠檬酸 2.1g/L；乙二胺四乙酸二钠 0.38g/L；TMB 0.4g/L 。

终止液： 2M H₂SO₄。

需要但未提供的物品：

1. 新鲜的蒸馏水或去离子水

2. 一次性手套

3. 精确的微量移液器和洁净的吸头

4. 干净的吸水纸

5. 37℃恒温箱或水浴锅

6. 计时器

7. 洗板机或洗瓶机

8. 振荡器

【储存条件及有效期】

  试剂盒应置2～8℃中避光保存，有效期12个月。

生产日期及有效期见标签。

【适用仪器】

酶标仪 检测波长450nm，参考波长630nm

【样本要求】

1. 样本采集不需要特殊准备，不需要受检者禁食，按照正常的采血技术收集血液，全血样品最好先放置37℃处理2小时，再将血样品充分离心，3000转/分钟离心6分钟以上，使血清（浆）不含或极少含血细胞。如果为抗凝血样品，应将血样品充分离心后，最好再放置室温2小时以上。

2. 样本可使用血清或血浆，柠檬酸、肝素或EDTA等抗凝剂不会影响实验结果。

3. 样本中含用叠氮钠会影响实验的结果，高度溶血的样本、没完全收缩的血清样本或有微生物污染的样本可能会引起错误的结果。

4. 新鲜的样本在2～8℃无菌条件下可保存一星期，新鲜样本可长期贮存在-20℃或以下，避免反复冻融。

【检验方法】

1. 实验准备：从冷藏环境中取出试剂盒，在室温下平衡30分钟，同时将浓缩洗涤液作1：20稀释。

2. 加待测标本：加入待测标本每孔0.05毫升（待测样本做1:30稀释），并设阳性对照2孔，阴性对照2孔，均0.05毫升，空白对照1孔。

3. 加酶结合物：每孔0.05毫升，空白对照孔不加，充分混匀，贴上胶纸，置37℃孵育30分钟。

4. 洗板：1）手工洗板：弃去反应板条孔内液体，在吸水纸上拍干；用洗涤液注满每孔，静置5～10秒，弃去孔内洗涤液拍干，如此反复5次，拍干。

2）洗板机洗板：选择洗涤5次的程序洗板，洗液应注满每孔，并确保每次吸净无残留，最后在吸水纸上拍干。

5. 加显色剂： 先加显色剂A，每孔0.05毫升； 再加显色剂B，每孔0.05毫升；充分混匀，放置37℃避光孵育15分钟。

6. 终止反应： 每孔加入终止液0.05毫升，混匀。

7.测定：用酶标仪读数，可选择单波长450 nm（以空白孔校零）或双波长450/630 nm，读取各孔OD值。读数须在终止反应后10分钟内完成。

【阳性判断值】

Cutoff 值计算： 原倍血清COV = 阴性对照平均OD值×0.3

               1:30稀释血清COV = 阴性对照平均OD值×0.5

标本OD值≥COV为阴性，标本OD值＜COV为阳性。

【检验结果的解释】

1. 阴性结果表明样本中不含乙肝核心抗体（抗-HBc），或样本中的乙肝核心抗体（抗-HBc）含量低于试剂盒的检测范围。

2. 阳性结果表明样本中含有乙肝核心抗体（抗-HBc），或非特异反应因素。

3. 阳性结果的样本需要再进行重复实验，只有经过重复或再重复实验仍为阳性结果的样本，可认为是乙肝核心抗体（抗-HBc）阳性。所有重复结果为阳性的样本应经过适当的手段进行确认。

阳性结果的样本如复检为阴性结果应被认为是阴性样本，重复不出阳性结果可能属于下列一个或多个技术问题引致：

1） 由于仪器或加样器造成的交叉污染。

2） 显色剂被金属离子污染。

3） 由于试剂滴漏造成的交叉污染。

4） 不充分的洗板或最后吸去不彻底。

      4. 血清中若检测到低滴度乙肝核心抗体（抗-HBc），往往只表明既往感染，有流行病学意义。只有检测到高滴度抗体（如1:30），或连续检测抗体滴度逐渐升高时，乙肝核心抗体（抗-HBc）才可作为感染指标。

【检验方法的局限性】

   所有高敏感性的免疫实验系统都存在潜在的非特异性反应，所以重复的阳性结果应以一个适当的方法进行确认。

【产品性能指标】

1 试剂外观为澄清透明液体，无絮状沉淀物。

2 阴性参考品符合率：15份阴性参考品检测结果不得出现假阳性。

3 阳性参考品符合率：15份阳性参考品允许出现1份假阴性。

4 最低检出量：用最低检出量参考品测定应≤1IU/mL。

5 精密性：用精密性参考品测定，CV（％）应不高于20％（n=10）。

6 稳定性试验：试剂各组分置37℃至少6天，检定结果应达到标准1～5。

7 装量：≥标示装量。

【注意事项】

1. 本品仅用于体外诊断，仅限检测人体血清、血浆；检测结果作为诊断指标之一。

2. 从2～8℃条件下取出的样本应置室温平衡30分钟再进行检测。

3. 须确保样品加样量的准确，如果加样不准确，可能会导致错误的实验结果。

4. 使用微量移液器手工加样时，每次应该更换吸头吸取样本。

5. 用滴瓶滴加时，请将甁中液体摇匀，并弃去1～2滴后垂直匀速地滴加。要避免将组份中的液体触到或溅到微孔边缘上，特别是酶结合物。

6. 在操作过程中应尽量避免反应微孔中产生气泡。

7. 浓缩洗涤液系高浓度磷酸盐，可能会形成结晶，如未完全溶解，会影响实验结果，同时可能会堵住自动加样器或洗板机管道。若出现结晶，请放置37℃充分溶解，然后稀释混匀使用。

8. 封板胶纸不能重复使用。

9. 用水浴锅反应时，请将反应板浸放于水中1/3，底部以网格支撑物支撑，水温控制在37℃。

10. 洗板：1）以洗板机洗板时，洗板机的加液量至关重要，既避免洗液过量溢出，又能充满反应微孔中，洗板次数不应少于5次，并经常注意检查加液头是否堵塞。

2）手工洗板时，请勿使用带纸屑的吸水材料拍板，以防外源性过氧化物酶类似物或氧化还原物质与显色剂发生反应，影响检测结果的准确性。

3）洗板时所用的吸水纸请勿反复使用。

4）洗板机最好在每次使用前、后，用蒸馏水或去离子水清洗干净，以防止管路堵塞或腐蚀。

11. 如果用任何试剂接触皮肤和眼睛，必须用大量清水对该部位进行扩大清洗和消毒；终止液为硫酸，具有腐蚀性。

12. 试剂盒内有关组份及临床样本均应视为有潜在传染性，请按相关的实验室工作规范来执行和处理。