【产品名称】

通用名称:丙型肝炎病毒核心抗原检测试剂盒（酶联免疫法）

【包装规格】

96人份/盒

【预期用途】

本产品用于体外定性检测人血清和血浆中的丙型肝炎病毒游离核心抗原。

利用双抗体夹心酶联免疫法原理（ELISA）定性检测人血清或血浆样品中的丙型肝炎病毒游离核心抗原，做辅助检测用。

丙型肝炎病毒（Hepatitis C Virus，HCV）是引起输血后病毒性非甲非乙型肝炎的主要病原，主要通过输血、静脉吸毒传播，也可通过密切接触和母婴传播。目前全世界约有1.3至1.7亿人为慢性丙肝病毒感染，每年有35万多人死于与丙型肝炎相关的肝脏疾病，据估计，每年有三、四百万人感染丙肝病毒。

丙肝病毒感染有时会导致急性症状疾病。从严重程度看，感染丙肝病毒有可能只出现几周轻微症状，也可能终身患有严重慢性肝病，并可能导致肝硬化和肝癌。最初被感染后，大约80%的人并不会出现任何症状。可能出现的急性症状包括发热、全身乏力、食欲下降、恶心、呕吐、腹痛、尿色深、大便颜色变浅、关节酸痛和黄疸（皮肤和眼白发黄）。慢性感染者出现症状，可能表明其患有晚期肝病。一般地，15~20%左右的HCV感染者为自限性感染，超过80~85%的感染者发展为慢性丙型肝炎，其中又有20%的可发展为肝纤维化，最终有4~5%的肝纤维化患者发生肝细胞性肝癌，危害十分严重。丙型肝炎是由丙肝病毒引起的肝病。

丙型肝炎核心抗原检测是新近发展的一种HCV感染的检测方法。由于感染HCV后，HCV核心抗原出现较早，且与血清中HCV RNA载量呈正相关，并在HCV感染治愈或康复后消失，因此，可作为HCV感染的早期诊断、献血员筛查、慢性HCV感染诊断、高危人群监测、免疫功能障碍患者的HCV感染诊断、鉴别既往感染抑或现症感染，并可用于抗病毒疗效的预测和监测。

【检验原理】

本品由基因重组表达的丙型肝炎病毒核心区抗原（HCV-cAg）免疫小鼠制备的单克隆抗体包被微孔板和酶标记抗HCV-cAg单克隆抗体及阳性、阴性对照血清等组成，应用双抗体夹心酶联免疫法原理（ELISA）检测人血清或血浆样品中丙型肝炎病毒游离核心抗原。

【主要组成成分】

注意：不同批号的组分不得混用。

各组份主要组成：（1）抗体包被板：包被有针对核心抗原的单克隆抗体；（2）酶结合物：三羟甲基氨基甲烷缓冲液，山羊血清，牛血清白蛋白；（3）阳性对照血清：加入丙型肝炎病毒核心抗原检测为阳性人血清；（4）阴性对照血清：加入丙型肝炎病毒核心抗原检测为阴性的血清；（5） 洗涤液：NaCl，曲拉通 X-100；（6）显色剂A：三水合乙酸钠，过氧化尿素；（7）显色剂B：柠檬酸，乙二胺四乙酸，四甲基联苯胺；（8）终止液：硫酸；（9）样品稀释液： Tris 缓冲液，NaCl，酪蛋白钠，牛血清白蛋白，吐温-20，曲拉通X-100，山羊血清，硫柳汞。  

其他所需物品和仪器

1、新鲜制备的蒸馏水或去离子水；

2、一次性手套；

3、精确的微量移液器和洁净的吸头；

4、干净的吸水纸；

5、37℃恒温箱或水浴箱；

6、计时器；

7、洗板机或洗瓶；

8、振荡器；

9、酶标仪。

【储存条件及有效期】

2～8℃避光保存，有效期12个月。

生产日期及有效期至见标签。

【适用仪器】

自动酶标测定仪，双波长时设置主波长450nm，参考波长630nm。单波长时设置检测波长为450nm，并需设置空白对照调零。

【样本要求】

    1、样本可以使用血清或者血浆，柠檬酸钠、肝素或EDTA等抗凝剂不会影响实验结果。

2、样本无需特殊制备处理，采用正确医用技术采集全血样本，静置半小时以上后，3000转/分钟离心10分钟以上，充分分离血清，使血清不含或极少含红、白细胞，否则可能会导致假阳性结果。

3、不能使用加热灭活处理后的样本，脂血样本应当在实验前采用超速离心法澄清样本。

4、黄疸或严重污染的样本将导致错误的结果。

5、样本中含有叠氮钠会影响实验结果，不能用叠氮钠做样本防腐剂。

6、血清样本在未充分凝集前离心将导致纤维蛋白的存在，为避免纤维蛋白对结果的影响，必须确保离心处理前样本已经充分凝集。对于正在接受抗凝剂治疗的病人样本，需要延长凝集时间。

【检验方法】 

1、实验准备

（1）从冷藏环境中取出试剂盒，在室温下平衡30分钟。

（2）洗涤液配制：试剂盒中的洗涤液为浓缩洗涤液，在合适的洁净容器内用新鲜制备的蒸馏水或去离子水将浓缩洗涤液稀释20倍，混匀备用。

（浓缩洗涤液为高浓度磷酸盐缓冲液，在温度低时，可能会有结晶析出；请在使用前确保浓缩洗涤液无结晶析出，如发现有结晶析出，请放置水浴锅中加热溶解，否则会影响洗涤效果。）

2、操作程序

1）每次实验需在包被板上设置一个空白孔，设置阴、阳性对照各双孔。

2）加阳性对照血清：设两孔为阳性对照，每孔加入阳性对照血清200μL。

3）加阴性对照血清：设两孔为阴性对照，每孔加入阴性对照血清200μL。

4）加样品稀释液：每孔（不包括阴、阳性对照孔）中加入100μL样品稀释液。空白孔加入200μL样品稀释液。

5）加样：样品孔每孔加入样品（血清或血浆）100μL。

6）温育：用不干胶片封板后置37℃±1℃温浴振荡60分钟。

7）洗涤：小心揭掉封板膜，吸去反应板条孔内液体，用洗涤液工作液注满每孔，每孔应加入不少于400μL的洗涤液工作液。静置5～10秒，吸去孔内洗涤液，如此重复5次。最后在干净的吸水纸上拍干。

8）加酶结合物：每孔加200μL酶结合物。

9）温育：用不干胶片封板后置37℃±1℃温浴30分钟。

10）洗涤：操作同7。

11）加显色剂：每孔先加入100μL显色剂A，再加入100μL显色剂B，充分混匀，37℃±1℃温浴避光显色15分钟。

12）终止反应：每孔加50μL终止液，充分混匀。

13） 结果测定：结果需在反应终止后10分钟内进行测定。使用酶标仪测量各孔吸光度值，可选择单波长450nm（需设空白孔调零），或选择双波长主波长450nm，参考波长630nm，读取各孔OD值。

【【阳性判断值】

临界值（CUT OFF）确定：阴性对照平均值+0.06（阴性对照OD值≤0.06时按0.06计算）。

阳性对照每孔OD值>0.8，阴性对照OD值每孔＜0.1时，测定结果有效。

结果判定：

（1）待测样品OD值≥临界值（CUT OFF）判定为HCV核心抗原阳性；

（2）待测样品OD值＜临界值（CUT OFF）判定为HCV核心抗原阴性。

对初检阳性的样品，应进行双孔复检以确认真实结果。

【【检验结果的解释】

1、血清样本未完全凝集、血浆样本包含纤维蛋白或样本被严重污染都会对结果造成影响。

2、实验中使用长时间贮存或反复冻融的样本会对本试剂的检测灵敏度造成影响，建议使用新鲜样本进行实验。

【检验方法的局限性】

1、本试剂盒仅用于定性检测人血清或血浆样品中的HCV游离核心抗原。

2、由于ELISA反应原理的限制，本试剂检测结果阴性并不能完全排除HCV感染的可能，检测结果阳性必须结合确证试剂或其他指标和临床信息进行分析。

【【产品性能指标】

1、用5份企业HCV核心抗原阳性参考血清检测，结果不得出现假阴性；用4份国家HCV核心抗原阳性参考血清检测，阳性参考品符合率（+/+）应≥3/4。

用10份企业或国家HCV核心抗原阴性参考血清检测，结果不得出现假阳性。用4份企业最低检出限参考品检测，S1、S2 和S3应为阳性；S4为阴性；用5份国家最低检出限参考品检测，L1、L2 和L3应为阳性，L4﹑L5可阳性或阴性。   

用企业或国家精密性参考品重复10次检测，所有孔实验结果均为阳性，CV（%）≤15%（n=10）。

稳定性试验各组分置37℃6天后，上述四项指标均应符合规定。

2、本试剂检测丙型肝炎病毒核心抗原的灵敏度为1pg/mL。

3、交叉反应实验表明，HBV，HIV和HAV阳性样本不影响本试剂盒对HCV核心抗原的检测。对25例RF高浓度阳性样本及23份ANA高浓度阳性样本分别采用本试剂进行HCV核心抗原检测，两类样本假阳性数均为1例，特异性分别为96.0%和95.7%。

4、临床研究60份同源血（同一患者的血清和血浆）检测结果完全一致。

【【注意事项】

1、从2～8℃条件下取出的样本应置于室温平衡30分钟再进行检测。

2、须确保加样量的准确，如果加样不准确，可能会导致错误的实验结果。

3、使用微量移液器手工加样时，每次应该更换吸头吸取样本。

4、在操作过程中应尽量避免微孔中产生气泡。

5、浓缩洗涤液系高浓度磷酸盐，可能会形成结晶，如未完全溶解，会影响实验结果，同时可能会堵住自动加样器或洗板机管道。若出现结晶，请放置37℃充分溶解，然后稀释均匀使用。

6、封板胶纸不能重复使用。

7、用水浴锅反应时，请将反应板浸放于水中1/3，底部以网格支撑物支撑，水温控制在37℃。

8、洗板：（1）以洗板机洗板时，洗板机的加液量至关重要，即避免洗液过量溢出，又能充满反应微孔中，洗板次数不应少于5次，并经常注意检查加液头是否堵塞。

（2）手工洗板时，请勿使用带纸屑的吸水材料拍板，以防外源性过氧化物酶类似物或氧化还原物质与显色剂发生反应，影响检测结果的准确性。

（3）洗板时所用的吸水纸请勿反复使用。

（4）洗板机最好在每次使用前、后，用蒸馏水或去离子水冲洗干净，以防止管路堵塞或腐蚀。

9、如果有任何试剂接触皮肤和眼睛，必须用大量清水对该部位进行扩大清洗和消毒；终止液为硫酸，具有腐蚀性。

10、试剂盒内有关组份及临床样本均应视为有潜在传染性，请按相关的实验室工作规范来执行和处理。